動物源性DNA檢測試劑盒需要嚴格按照操作步驟操作,試劑配制和加樣等步驟請嚴格按照說明書要求在冰盒上操作。
反應液中的成分對光敏感,應避光保存。試劑使用前要*解凍,但應避免反復凍融,推薦使用前離心30秒,并按檢測頻次將反應液以適當體積分管保存。擴增管請置于密封袋內(nèi)丟棄,當日清理,開蓋易造成氣溶膠污染,禁止開蓋。
建議使用試劑配套動物基因組DNA提取系列產(chǎn)品,具體過程詳見產(chǎn)品說明書。剪下所需測試數(shù)的已含有反應液的PCR管,放置在室溫待解凍后,離心30秒后揭開封口膜,向每管反應液中分別加入5μL模板,順序為NG、待測樣品模板。蓋好配套的PCR管蓋后,渦旋混勻30秒,離心1分鐘,立即進行PCR擴增反應。
需要按試劑準備中描述的方法,配制好
動物源性DNA檢測試劑盒各種組分的工作液。
所有試劑和組分都先恢復到室溫,標準品、質(zhì)控品和樣品,建議做復孔。
從鋁箔袋中取出所需板條,剩余的板條用自封袋密封放回冰箱。
設置標準品孔、樣本孔和空白孔,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL,樣本孔加待測樣本50μL,空白孔不加。
用封板膜蓋住反應板,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60分鐘。
除空白孔外,標準品孔和樣本孔,加入過氧化物酶標記的檢測抗體100μL。
揭開封板膜,棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置20s,甩去洗滌液,吸水紙上拍干。
將底物A和B按1:1體積充分混合,所有孔中加入底物混合液100μL,用封板膜蓋住反應板,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育15分鐘;
如此重復4次,若使用自動洗板機,請按洗板機操作程序進行洗板,添加浸泡20秒的程序,可以提高檢測的精度。洗板結(jié)束,加底物前,要在干凈不掉屑的紙上,充分拍干反應板。